柱层析加速,层析柱上柱子后压力大怎么办?

原创 访客  2021-05-15 19:43:13  阅读 182 次 评论 0 条
摘要:

不会有太大问题的柱层析加速,放心吧。 因为色谱系统是一个流路系统,你关闭泵后仅仅是关闭了动力输入,但是废液还是在不停的向柱后排出,直至色谱柱前端压力降至0为止。所以不管你压力是否降到0,色谱柱仍然在向后排液来降低压力,不会有压力一直保存在柱内的情况。 不过压力没降就关闭泵确实不是一个好习惯,因为色谱柱内的固定相填充是有排列顺序和方向的,这也是为什么色谱柱要有固定方向使用,反冲色谱柱会对固定相的排列产生影响以及固定相流失等情况。而压力骤变会对柱内固定相产生冲击,甚至产生涡流,造成固定相的排列混乱以

不会有太大问题的柱层析加速,放心吧。

因为色谱系统是一个流路系统,你关闭泵后仅仅是关闭了动力输入,但是废液还是在不停的向柱后排出,直至色谱柱前端压力降至0为止。所以不管你压力是否降到0,色谱柱仍然在向后排液来降低压力,不会有压力一直保存在柱内的情况。

不过压力没降就关闭泵确实不是一个好习惯,因为色谱柱内的固定相填充是有排列顺序和方向的,这也是为什么色谱柱要有固定方向使用,反冲色谱柱会对固定相的排列产生影响以及固定相流失等情况。而压力骤变会对柱内固定相产生冲击,甚至产生涡流,造成固定相的排列混乱以及固定相流失,导致柱效下降。所以要避免压力的骤升骤降。故目前的色谱仪生产厂商都会在泵启动和泵停止时对流速进行控制,形成缓慢的升降,避免对色谱柱造成冲击。

高效液相洗柱子时一般需注意什么?

如果用5:1的洗脱剂洗脱时,将产物和原料冲到了一起,但是并未达到柱子底部,那么再使用7:1或者8:1是有可能再将产物和原料分开的,但是考虑到5:1的石油醚比乙酸乙酯洗脱效率较强,己酸乙酯的浓度较大,可先用纯的石油醚进行洗脱操作,以降低柱子内乙酸乙酯的浓度,再用7:1或者8:1的洗脱液进行洗脱。如果已经将原料与产物洗脱至靠近柱子底部,那么考虑用浓度较高的乙酸乙酯将混合物全部洗脱干净,再进行减压浓缩,最后重新过柱,这个是最保险的方法,因为高浓度的洗脱液会对原有的洗脱路径进行破坏,在最后可能当产物还没有洗脱完全时,原料就会跟着一起洗脱下来,这样就降低了产物的回收率。最后提醒一句,在进行柱层析操作之前,可利用薄层色谱法筛选合适浓度的展开剂,再进行试验,这样就可以避免上述问题,还可以提高提纯操作的效率。

欣贝莱~盛

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